囊胚期胚胎二次冰冻复苏移植1例的出生结局和儿童发育情况随访

体细胞会的于是又生保存是正因如此受精技忍术(ART)外科手术中所的极为重要分组已成部分，通过于是又生保存可以将病变过多的体细胞会保存下来，减低病变的累积怀孕叛将。体细胞会的 于是又生保存可以在体细胞会发育不良的任意过渡期进行时，如有的中所心正因如此于是又生原核期体细胞会或卵裂期体细胞会，从前随着培训框架的完善，越来越多的IVF中所心进行时上皮细胞培 养以期减低怀孕叛将和减小多绒毛怀孕叛将，因此深入研究者不够倾向于进行时上皮细胞于是又生保存。于是又生方法可以为程序 简化慢速于是又生，也可以为于是又进一步于是又生。我们中所心自 2004年起，对第3天移植版后的体细胞会全部进行时上皮细胞培训，如有上皮细胞构已成则进行时于是又进一步于是又生保存。然而在病理工则有中所常不存在一些偶发的意外有可能，如病变在蓬勃发展移植版日因突发性原因无法进行时体细胞会移植版，只能将蓬勃发展的体细胞会丢弃或终于于是又生后择期蓬勃发展移植版。但是我们无法指明上皮细胞二次于是又进一步于是又生后的确保可用性如何。目在此先前关于人类体细胞会二次于是又生的古文献较极少，尽管有古文献路透社了一些病变必须在体细胞会二次于是又生蓬勃发展移植版后赢取活产，但这些路透社多为第一次于是又生为原核 期体细胞会或卵裂期体细胞会，蓬勃发展后培训至上皮细胞终于于是又生[1。4]。Kumasako等[3]看来二次于是又生才会减小胚层 绒毛的则有物叛将，但是关于上皮细胞于是又生蓬勃发展后终于于是又生复 苏移植版的路透社极极少。且据我们所知，亦然不深入研究来分 析上皮细胞二次于是又进一步于是又生蓬勃发展移植版后的单单生命运。在 此病变路透社中所，我们描述了上皮细胞二次于是又生蓬勃发展移植版 后早产儿的单单生命运，并对此病变的**进行时仍然 随访仔细观察，详细记录了此婴幼儿的双脚素质发育不良有可能。一、病理资料病变34岁，丈夫35岁，因输卵管因素原发不育 到我院受精中所心就诊，不育年限6年。根据世界戍 生分的组织新标准，男方精液参数短等待时间。病变2005年在本 中所心进行时卵巢刺激后**，在**长周期所采行的促 性腺方案按照本中所心的正因如此进行时，在上一长周期的黄 体期开始应用领域促性腺激素释放激素抑制(GnRH-a)，当垂体远超逐闭环后，用卵巢排卵(FSH，果纳芬，默克)进行时卵巢刺激。当促已成卵巢直径远超18～ 20 rnlTl时，注射人绒毛膜促性腺激素(HCG，艾泽，默克)，38 h后进行时阴道超声引导的卵巢穿刺来获**子会。合共赢取13枚卵子会，进行时正因如此授精后， 13枚卵子会受精，在受精后第3天仔细观察体细胞会的卵裂有可能，选定2枚优质体细胞会进行时移植版。移植版后多余的 11枚卵裂期体细胞会经病变理睬拒绝后全部进行时上皮细胞培训，在受精后第5日或第6日分别仔细观察上皮细胞构已成有可能及结构上。采行Gardner满分管理了系统上皮细胞进行时满分，该病变合共构已成2枚上皮细胞，上皮细胞满分计有4BB和4BC。将所构已成的上皮细胞按照我中所心正因如此方法[5]进行时于是又进一步于是又生，确切操为：上皮细胞于是又生在此先前进行时人工皱缩，即用激光器 管理系统在远离内细胞会旅的经年累月细胞会通到薄弱三处原子笔，让囊腔液流单单，使细胞会皱缩已成旅；然后将上皮细胞放入含有7．5％DMSO和7．5％甲醛的先于平衡正常液中所平衡正常 2 min，最后移入于是又进一步于是又生液中所平衡正常30 s，将体细胞会转至 移至于是又生环状(cryoloop环状)上，直接嵌入液氮保存。 病变好吃长周期移植版未赢取怀孕，**3个月末后患 者进行时于是又生上皮细胞蓬勃发展移植版。人工长周期等待内膜，月末经 第2"-4天行正因如此B超检查，给予戊酸雌二醇(补佳乐，先灵，柏林)口服，口服剂量根据病变正因如此的内膜有可能 调整(2～18 rag／d)。B超监测内膜生长有可能，当内膜厚 度远超8 ITlln时肌肉注射黄体酮(20 rng×2 d，40 mgX 2 d，20---一40 mg×1 d)，注射后第6天行上皮细胞蓬勃发展移植版。移植版在此先前1 d按照我中所心正因如此方法[5]进行时上皮细胞蓬勃发展：等待上皮细胞蓬勃发展液，在体细胞会培训皿内精制0．33 mol／L、0．2 mol／L麦芽糖溶液和基础培训液(GMoPS Plus， Vitrolife，瑞典)，从液氮中所取单单随身携带有上皮细胞的于是又生环状，空气 中所返程5 S后，将体细胞会依次嵌入上述蓬勃发展液中所，等待时间分 别为2 min、3 min和5 min。蓬勃发展后的2枚上皮细胞均进行时 激光器正因如此孵出，并不需要在远离细胞会旅的表面随身携随身携带部位切割表面随身携带的1／4左右。最后将上皮细胞移人提在此先前等待好的 上皮细胞培训液(G2，ⅥnDlife，瑞典)中所，摆放在37℃、6％OQ 和5％Q培训箱内培训16 h。移植版在此先前仔细观察上皮细胞的兼并 和孵单单有可能。 该病变在上皮细胞蓬勃发展移植版日突发急性脑出血不能 进行时上皮细胞移植版，在病变理睬拒绝的在此之假定下终于按照上述上皮细胞于是又进一步于是又生操则有步骤进行时体细胞会于是又生。病变手 忍术6个月末后终于进行时于是又生上皮细胞蓬勃发展移植版，确切操则有步骤同上，上皮细胞蓬勃发展后16 h进行时移植版，病变已尝试怀孕，并于孕38周哺乳一幸康婴儿，身长52 CITI，增重3 550 g。 由于这是本中所心第1实有上皮细胞二次于是又生的病变，所以我们对其女进行时了仍然的随访。**的父亲体格为 185 cm，母亲体格为167 cm**1岁时，体格83 cm， 增重12 kg；3岁时，体格97cm，增重21kg，双脚幸 康，无疾病；5岁时，体格117 cm，增重31 kg；7岁时，体格135cm，增重40 kg；9岁时体格154cm，增重50 kg；12岁时，体格168 cm，增重62 kg；10岁时，睾丸单单现发育不良；12岁时月末经初潮。该女孩性格开朗，参加学校管乐队、校篮球队等经常性活动，并取得很好的已成绩，其人格短等待时间，进修已成绩在班级在此先前5名。二、讨论在此病变中所，病变赢取13枚已成熟卵子会，13枚卵子会受精，经过培训后构已成2枚上皮细胞并玻璃幕墙 简化于是又生保存。病变在先于定上皮细胞蓬勃发展移植版日突发急性脑出血，在其理睬拒绝的在此之假定下将蓬勃发展后的上皮细胞终于于是又生保存。此为病理工则有中所一些难以不必要的有可能。如果将病变体细胞会丢弃相当可惜，而体细胞会终于于是又生保存 的确保可用性亦然不指明。到目在此先前为止，虽然已经有一些胚层 绒毛在二次于是又生后赢取活产的病变路透社，但都是第一次 体细胞会于是又生时为原核期或卵裂期体细胞会，蓬勃发展后培训至上皮细胞过渡期终于于是又生。本深入研究是首次对上皮细胞二次于是又进一步 于是又生后赢取的活产进行时仍然随访的病变路透社。 有学者此前用小鼠体细胞会深入研究间歇于是又生蓬勃发展对体细胞会的受到影响，他们发现与未于是又生的体细胞会相比之下，于是又生体细胞会 在孵单单时的细胞会数额极少，且小鼠体细胞会必须在已尝试的 间歇于是又生蓬勃发展3次后即使如此具有肾脏发育不良能力[6]。在此病变中所，我们对比了两次于是又生在此先前后上皮细胞的哺乳类巨大变简化，第1次于是又生是在第5天，上皮细胞为4期，总质量为 4BB，第一次蓬勃发展后培训16 h，上皮细胞几乎孵单单，已沦为 6期上皮细胞，总质量为6BB；第2次于是又生蓬勃发展后，培训16 h 上皮细胞总质量为6BB。上皮细胞结构上从在结构上看，两次于是又生后 没有相似之三处，上皮细胞细胞会只剩良好，貌似上皮细胞过渡期体细胞会的 二次于是又进一步于是又生对体细胞会的发育不良无太大受到影响。比对原 因，我们看来有可能与以下几个全面性有关。首先，上皮细胞在于是又生之在此先前进行时了激光器皱缩，将上皮细胞腔内液全部放 单单，使上皮细胞腔崩落，待上皮细胞几乎皱缩后于是又进行时上皮细胞的 于是又进一步于是又生，这样必须减极少于是又生每一次中所冰晶的构已成， 减小对体细胞会的受损。有深入研究也推测上皮细胞的人工皱缩 必须适当减低上皮细胞于是又生后蓬勃发展的只剩叛将[7-9]。而且于是又生上皮细胞蓬勃发展后的正因如此孵出也相当极为重要，在体细胞会于是又生每一次中所，人类上皮细胞的表面随身携带变硬，会限制体细胞会的向外孵 单单，有深入研究看来上皮细胞在兼并每一次中所不断地变大皱缩， 如果在表面随身携带单单口三处卡的次数多了，上皮细胞就会衰亡[10]。而且，于是又生蓬勃发展后的上皮细胞，由于刚刚蓬勃发展后囊 胚层腔还三所处皱缩正常，体细胞会和表面随身携带之间的空隙远超 大于卵裂期体细胞会的空隙，因此上皮细胞的正因如此孵出不够确保安全。我们的数据发现，未经过正因如此孵出的上皮细胞，蓬勃发展后过夜培训，几乎孵单单的比实有(340A)远低于激光器孵出后的上皮细胞(85％)，不够高的孵单单比实有这样一来不够高的着床 机会。其次，上皮细胞的于是又生保存不同于卵裂期体细胞会，它 自身有很多优点。必须发育不良至上皮细胞过渡期的体细胞会经过 二次并不需要，发育不良能力间歇性的体细胞会已经被首轮；上皮细胞的 细胞会数目多，尤其是经年累月细胞会层细胞会，受损后复原能力强，极少数细胞会死亡后对体细胞会发育不良能力受到影响小；上皮细胞 的细胞会不够小，呈梭形，表面积／体积比大，对水解、复水引发的体积巨大变简化耐受性高效叛将[11]。因此我们确实上皮细胞 二次于是又生后细胞会没有受损的原因有可能与此有关。 目在此先前虽然有一些体细胞会二次于是又生赢取活产的报 道，但是对早产儿仍然随访的路透社相当极少见。在此病变中所，上皮细胞经过二次于是又进一步于是又生后，即使如此必须已尝试 则有物，病变在足月末哺乳一短等待时间增重的早产儿，也提醒 上皮细胞二次于是又生似乎未必受到影响早产儿的单单生命运。努力进修古文献，我们发从前2011年的一项小型深入研究中所，则有 者比对了一次于是又生和二次于是又生后体细胞会单单生命运的差 异色[12]。在文中所一次于是又生，就是将2PN期或卵裂期的体细胞会进行时于是又生保存，蓬勃发展后移植版；二次于是又生指的是 于是又生的体细胞会蓬勃发展后进行时肾脏培训至上皮细胞过渡期，于是又进 行于是又生。结果提醒二次于是又生分组的双绒毛叛将低于一次于是又生分组，他们看来是二次于是又生分组移植版的体细胞会数较极少造 已成的。此深入研究还提醒二次于是又生分组的单单生增重额高于 一次于是又生分组，尽管没有统计学相似之三处；在二次于是又生分组未 于是又次发生专一间歇性，在一次于是又生分组于是又次发生1实有专一间歇性；两 分组均未于是又次发生发育不良不良或早产儿死亡。尽管这些并非上皮细胞 二次于是又生的深入研究，但从一定层面上体现了体细胞会在二 次于是又生后未必受到影响早产儿的单单生命运。我们对此新 生儿随访至9岁，该婴幼儿双脚素质发育不良短等待时间，人格发育不良正 常，心理发育不良短等待时间。与之在此先前冻融体细胞会移植版(FET)单单 生婴幼儿的随访论断一致[13,7]。Pelkonen等比对 了FET单单**孩的专一间歇性的于是又次发生有可能，看来 FET单单**孩于是又次发生专一间歇性的比实有与好吃移植版类似于，最后Pelkonen等[14]对FET始祖**进行时了一 项随访3年的深入研究，发现FET与好吃移植版单单生始祖 的双脚素质发育不良是类似于的。还有深入研究发现ART后单单生 始祖的神经运动发育不良全面性与自然现象怀孕始祖无显著差 异色，看来他们的神经发育不良、社会感情及语言进修并无 相似之三处[117]。可见体细胞会于是又生对早产儿仍然发育不良的影 响与好吃移植版体细胞会类似于。而从我们的病变路透社来 看，上皮细胞的二次于是又生也是相对确保安全的。 我们将上皮细胞二次于是又进一步于是又生后的体细胞会进行时移植版 后赢取已尝试怀孕，足月末哺乳一幸康婴儿，并进行时整整12年的随访，此婴幼儿双脚素质发育不良短等待时间，人格发育不良短等待时间，心理发育不良短等待时间。看来此上皮细胞二次于是又生后体细胞会即使如此具有很好的则有物潜能和发育不良潜能。但此病变仅为个实有路透社，上皮细胞间歇于是又生是否会引发体细胞会的受损仍不明 确，移植版间歇于是又生的体细胞会是否确保安全还需要进一步的深入研究，因此在病理工则有中所，我们仍应尽有可能不必要体细胞会的间歇冻融。参考古文献额。原始单单三处：王雪，甄绿然，孙正怡，郁琦等，上皮细胞期体细胞会二次于是又生蓬勃发展移植版1实有的单单生命运和婴幼儿发育不良有可能随访[J],受精医学杂志，2018,27(12).